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试验研究：“发酵床养猪” 垫料中常见病原菌检测
创建时间:2010-01-13     浏览次数：363

 

“发酵床养猪” 垫料中常见病原菌检测
 
四川省畜牧科学研究院兽医与生物技术研究所，成都610066
国家生猪产业技术体系四川创新团队，成都 610066
 
提要：为了解“发酵床”养猪方法的科学性，本试验对三台县某种猪场的以北京华夏康源科技有限公司“金宝贝”菌种制作的发酵床和以日本洛东公司菌种制作的发酵床及猪常规饲养圈舍中的病原菌进行了检测。检测方法，分别采集发酵床表层、中层、深层垫料样品和常规圈舍内粪尿污物样品，在实验室分离其细菌和鉴定，再进行小白鼠致病性试验。细菌分离结果，在发酵床中分离到6类细菌，在常规饲养圈舍内分离到3类细菌，即发酵床中有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、单胞杆菌、变形杆菌、芽孢杆菌，常规饲养圈舍内有大肠杆菌、沙门氏菌、解脲寡源杆菌。小白鼠致病试验结果，发酵床中致病菌有5类，常规饲养圈舍中致病菌有2类，即发酵床1和发酵床2中的致病菌均为大肠杆菌、沙门氏菌、单胞杆菌、变形杆菌、蜂房类芽孢杆菌和常规饲养圈舍中的致病菌为大肠杆菌和沙门氏菌。在发酵床特有主要病原菌中，单胞杆菌可引起生猪的坏死性肠炎、坏死性肺炎、腹泻、子宫内膜炎等。变形杆菌可引起生猪腹泻、子宫内膜炎、膀胱炎、创伤感染等。蜂房类芽孢杆菌对生猪的危害需进一步试验印证。
 
1 被检猪场基本情况
1.1被检测猪场：三台县某种猪场
1.2检测时间：2009年11月25日～2010年1月8日。
1.3发酵床：猪场于2008年12月建成发酵床，至本采样时间已有11个月。
1.4饲养猪：发酵床和常规饲养圈舍内的猪均为育肥猪，饲养规模约1000头。
 
2 细菌检测
2.1 样品采集：在“三台县某种猪场”，有以北京华夏康源科技有限公司的“金宝贝”菌种制作的发酵床（以下简称发酵床1）、以日本洛东公司的菌种制作的发酵床（以下简称发酵床2）和常规饲养圈舍。分别对发酵床1和发酵床2内3个不同位置定点，每个点采集发酵床表层、中层、深层三个不同深度的垫料样品；同时，采集该种猪场常规饲养猪舍内的粪尿污物作为对照。
2.2细菌的分离鉴定：分别在四川省畜牧科学研究院兽医与生物技术研究所实验室和四川大学华西医院实验室，分离培养常见病原菌。根据细菌在鉴别培养基上的生长情况、菌落形态进行鉴定；在显微镜下观察细菌的形态进行鉴定；采用细菌鉴定仪器鉴定其细菌种类。
2.3结果：在发酵床中分离到6类细菌，在常规饲养圈舍内分离到3类细菌，见表1。
发酵床中的6类细菌是大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、单胞杆菌、变形杆菌、芽孢杆菌，其中，单胞杆菌中有杀鲑气单胞杆菌、睾丸酮单胞杆菌、泡囊短波单胞杆菌，变形杆菌中有奇异变形杆菌、普通变形杆菌，芽孢杆菌中有蜂房类芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌。
常规饲养圈舍内的3类细菌是大肠杆菌、沙门氏菌、解脲寡源杆菌。
2.3.1发酵床1：在发酵床的表层分离到5类细菌，在发酵床的中层分离到5类细菌，在发酵床的深层分离到5类细菌。
2.3.1.1表层有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、变形杆菌、芽孢杆菌，其中，变形杆菌有奇异变形杆菌、普通变形杆菌，芽孢杆菌有蜂房类芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌。
2.3.1.2中层有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、单胞杆菌、普通变形杆菌、芽孢杆菌。其中，单胞杆菌有杀鲑气单胞杆菌、睾丸酮单胞杆菌、泡囊短波单胞杆菌，芽孢杆菌有蜂房类芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌。
2.3.1.3深层有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、单胞杆菌、奇异变形杆菌。其中，单胞杆菌有杀鲑气单胞杆菌、睾丸酮单胞杆菌、泡囊短波单胞杆菌。
2.3.2发酵床2：在发酵床表层内分离到4类细菌，在发酵床中层内分离到5类细菌，在发酵床深层内分离到4类细菌。
2.3.2.1表层内有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、奇异变形杆菌。
2.3.2.2中层内有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、单胞杆菌、芽孢杆菌，其中，单胞杆菌有杀鲑气单胞杆菌、睾丸酮单胞杆菌、泡囊短波单胞杆菌，芽孢杆菌有蜂房类芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌。
2.3.2.3深层分离出大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、芽孢杆菌，其中，芽孢杆菌有蜂房类芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌。
 
3 小白鼠致病试验
3.1方法：将分离鉴定出的细菌增菌后，按1×1010CFU/只的剂量接种小白鼠，接种后观察小白鼠发病和死亡情况。
3.2结果：发酵床中致病菌有5类，常规饲养圈舍中致病菌有2类。发酵床1和发酵床2中的致病菌均为大肠杆菌、沙门氏菌、单胞杆菌、变形杆菌、蜂房类芽孢杆菌，其中，变形杆菌有奇异变形杆菌、普通变形杆菌。常规饲养圈舍中的致病菌为大肠杆菌和沙门氏菌。
发酵床中分离的大肠杆菌的小白鼠死亡率为63.3%，常规饲养组分离的大肠杆菌死亡率为40%；发酵床中分离的沙门氏菌的小白鼠死亡率为100%，常规饲养组分离的沙门氏菌死亡率为60%；发酵床中分离的单胞杆菌、奇异变形杆菌、普通变形杆菌、蜂房类芽孢杆菌的小白鼠死亡率分别为53.3%、100%、20%、80%，发酵床中分离的葡萄球菌没有致病性，常规饲养组分离的解脲寡源杆菌也没有致病性，见表2。
 
4 讨论与结论
4.1发酵床内特有主要病原菌对生猪的危害：单胞杆菌可引起生猪的坏死性肠炎、坏死性肺炎、腹泻、子宫内膜炎等。变形杆菌可引起生猪腹泻、子宫内膜炎、膀胱炎、创伤感染等。蜂房类芽孢杆菌对生猪的危害需进一步试验印证。
4.2结论：发酵床中致病菌有5类，常规饲养圈舍中致病菌有2类，这表明发酵床中的病原菌种类多。
 
表1   微生态发酵床常规菌分离鉴定情况
养殖模式
采样垫料
大肠杆菌
沙门氏菌
葡萄球菌
单胞杆菌
(杀鲑气、睾丸酮、   泡囊短波)
奇异变形杆菌
其它菌
芽孢杆菌
(蜂房类/苏云金/枯草)
普通变形杆菌
解脲寡源杆菌
发酵床1
表层
∨
∨
∨
×
∨
∨
∨
×
中层
∨
∨
∨
∨
×
∨
∨
×
深层
∨
∨
∨
∨
∨
×
×
×
发酵床2
表层
∨
∨
∨
×
∨
×
×
×
中层
∨
∨
∨
∨
×
∨
×
×
深层
∨
∨
∨
×
×
∨
×
×
常规饲养
 
∨
∨
×
×
×
×
×
∨
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 
 
 
注：“∨”表示分离结果为阳性，“×”表示分离结果为阴性。
 
表2   微生态发酵床分离菌小白鼠致病性试验

细     菌
床号
位置
数量
死亡数
死亡率（%）
大肠杆菌
发酵床1
表
5
5
100
53.3
63.3
中
5
3
60
     深
5
0
0
发酵床2
表
5
5
100
73.3
中
5
1
20
      深
5
5
100
常规饲养圈舍
 
5
2
40
 
 
沙门氏菌
发酵床1
表
5
5
100
100
100
中
5
5
100
     深
5
5
100
发酵床2
表
5
5
100
100
中
5
5
100
     深
5
5
100
常规饲养圈舍
SC
5
3
60
 
 
葡萄球菌
发酵床1
表
5
0
0
0
0
中
5
0
0
     深
5
0
0
发酵床2
表
5
0
0
0
中
5
0
0
     深
5
0
0
单胞杆菌
杀鲑气/睾丸酮/泡囊短波
发酵床1
中
5
2
40
70
53.3
     深
5
5
100
发酵床2
中
5
1
20
 
奇异变形杆菌
发酵床1
表/深
5
5
100
 
 
发酵床2
表
5
5
100
 
 
普通变形杆菌
发酵床1
中
5
1
20
 
 
蜂房芽孢杆菌
发酵床1
表/中
5
4
80
 
 
解脲寡源杆菌
常规饲养圈舍
 
5
0
0
 
 
对 照 组
空白对照
 
5
0
0